【產(chǎn)品名稱】：人臍靜脈內(nèi)皮細胞

【代號】：HUVEC

【規(guī)格】：株

【生長特性】貼壁

【培養(yǎng)條件】DMEM 10% 優(yōu)質(zhì)FBS

【特惠價格】致電

【復(fù)蘇時間】1-2周

【運輸方式】聯(lián)邦及順豐

HUVEC人臍靜脈內(nèi)皮細胞是我公司明星產(chǎn)品之一，已被廣泛用于細胞信號途徑和多種腫瘤發(fā)生機制的研究，如以Allcells的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）作為載體，探究細胞粘著分子-1與靜脈血栓形成的關(guān)系，以及利用我們的產(chǎn)品研究血管生成素-4促使惡性膠質(zhì)瘤發(fā)生的機制等。僅供科研，不適用于臨床診斷和治療。

您一旦購入HUVEC細胞株產(chǎn)品，表明您已接受以下條件：

1. 即使現(xiàn)有的血清學(xué)檢測結(jié)果都是陰性，也會被當做潛在性的污染樣本處理。

2. 能夠建立和遵循恰當?shù)陌踩刂瞥绦?，保證使用這些產(chǎn)品的安全性。

接收提示：

1. 請仔細檢查外包裝是否是破損, 冷凍的產(chǎn)品是否融化；如有異常，請立即。

2. 請將產(chǎn)品放入液氮中保存，請不要放在-80℃冰箱中。

一、復(fù)蘇前準備

1． 包被液的配制：用去離水配制 0.5% 明膠溶液，高壓滅菌。

2． 培養(yǎng)瓶的包被：取2-4個T25培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶加入2－3ml 0.5% 明膠溶液，使包被液均勻的分布在培養(yǎng)瓶底面，置37℃培養(yǎng)箱中，放置（至少放置2小時）。

注意：復(fù)蘇和傳代后的細胞都需要接種在0.5% 明膠包被過的培養(yǎng)瓶中，這樣細胞會均勻的分布生長。

二、細胞復(fù)蘇和接種

1． 37℃水浴預(yù)熱培養(yǎng)液（HUVEC-004）。

2． 從液氮中取出細胞產(chǎn)品管，快速將其置入37℃水浴中解凍，直到管中只剩下zui后一片結(jié)晶（注意：不要讓水沒過產(chǎn)品管）。 用75%的酒精擦拭產(chǎn)品管外壁。

3． 將產(chǎn)品管中的細胞移至15ml無菌離心管中，慢慢逐滴加入預(yù)溫的37℃ 基礎(chǔ)培養(yǎng)液（HUVEC-004B）培養(yǎng)液4－5ml混勻，邊加邊搖勻。

4． 用1ml的培養(yǎng)液沖洗產(chǎn)品管，向15ml離心管中加入沖洗的細胞懸液，邊滴加邊搖勻。

5． 取10μl細胞懸液和10μl臺盼藍混勻后，取10μl計數(shù)。 這一步驟非常重要，能確定您收到的產(chǎn)品是否合格（詳見如何計數(shù)復(fù)蘇的細胞）

6． 細胞懸液在1500rpm，室溫條件下，離心10分鐘，去除上清。

7． 加HUVEC*培養(yǎng)液4－5ml, 輕輕混勻細胞，備用。

8． 接種前將 T25培養(yǎng)瓶中的包被液吸去，按2500－5000個細胞/cm2接種細胞。

9． 每個培養(yǎng)瓶中加*培養(yǎng)液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃、5%CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

三、細胞換液和培養(yǎng)

注意：復(fù)蘇或傳代后的細胞，請于24小時后，*次更換培養(yǎng)液

1． 復(fù)蘇后的細胞經(jīng)37℃、5%CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時，此時細胞已*貼壁，更換培養(yǎng)液后，請

繼續(xù)在37℃5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

2． 之后，每2-3天更換培養(yǎng)液1次，至細胞長至覆蓋培養(yǎng)面的 70-80% 可進行傳代或凍存。

3． 換液前，請將培養(yǎng)液從4℃中取出，使其恢復(fù)到室溫。

四、消化細胞

1．消化液的配制：用pH7.0-7.2的，分別配制0.5%胰酶液和0.04%EDTA-Na2液，

用前按1：1混合。在細胞傳代或凍存前先消化細胞。

將PBS或D-Hank’S液, 消化液，含10% FBS的 基礎(chǔ)培養(yǎng)液回復(fù)到室溫。

2．具體操作如下：

（1）吸去培養(yǎng)液，加入3ml PBS或D-Hank’S液，使PBS或D-Hank’S液均勻的分布在培養(yǎng)瓶細胞表面。之后，吸去PBS或D-Hank’S液。

（2）每個T25培養(yǎng)瓶加入消化液 2ml，使消化液均勻的分布在培養(yǎng)瓶細胞面。

（3）37℃消化2-5分鐘，在顯微鏡下看細胞回縮成圓形后，輕輕震動使絕大部細胞脫落。

（4）向每個培養(yǎng)瓶中加 3-5ml 含10% FBS的 基礎(chǔ)培養(yǎng)液（HUVEC-004B）液 中和胰酶的消化作用。

（5）用吸管輕輕吹打培養(yǎng)面使細胞*脫落后，吸至15ml無菌離心管內(nèi)。

（6）20℃，1500rpm離心5 分鐘，棄上清。

（7）加入一定培養(yǎng)液，調(diào)整細胞數(shù)量后，抽樣加入胎盤藍計數(shù)，得到細胞數(shù)和活性后，按細胞數(shù)傳代或凍存。

五、細胞傳代

1． 消化細胞（詳見第四步）。

2． 按2500－5000個細胞/cm2接種細胞于T25的培養(yǎng)瓶中（包被過0.5%明膠）。

3． 每個培養(yǎng)瓶中加*培養(yǎng)液（HUVEC-004）3-5ml, 后置于37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。

六、細胞凍存

1．消化細胞（詳見第四步）。

2．調(diào)整細胞數(shù)2-5×105個/ml，按含細胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)液（HUVEC-004B）液ml數(shù)，配制等量的冷凍保護劑。

3．冷凍保護劑的配制：FBS占80％，DMSO占20％

4．將細胞懸液于冰浴中，逐滴加入冷凍保護劑，邊滴加邊搖動，加完后用輕輕吹打混勻。

5．在冰浴中，將細胞分裝于凍存管中，1.8ml/管。

6．將凍存管置于凍存盒內(nèi)，放入-80℃冰箱中，24小時后轉(zhuǎn)入液氮中保存。

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